Т. Х. Измайлов, директор ТОО «Казфармаком», Казахстан
Применение эффективных средств дезинфекции является одной из важных задач обеспечения биологической безопасности птицеводческих хозяйств. В статье приведены результаты изучения эффективности противогрибкового препарата MycetoDez в опытах in vitro и при производственных испытаниях.
В структуре микробиоценоза животноводческих помещений значительную долю занимают грибковые микроорганизмы, в основном – плесени.
Подобно дрожжам и бактериям плесени и их споры распространены повсеместно и могут вызывать специфические заболевания у животных, птиц, рыб, пчел, растений и человека. Многие микозы инфекционны, а некоторые из них – контагиозны и представляют опасность. К наиболее значимым возбудителям относят такие грибки, как Penicillium chysogenum Thom., P. brevicompactum Dierckx, Aspergillus niger v. Thiegh., A. flavus Lk., Aspergillus fumigatus, Stachybotrys chartarum (Ehrenb) и S. hunghes, которые вызывают аллергию и респираторные заболевания [4].
Aspergillus fumigatus – возбудитель довольно часто встречающихся инфекций легких у птиц, однако и у человека случаи заболевания аспергиллезом не так уж редки [3]. Эти грибки содержатся в заплесневелом сене, опилках, соломе, зерне, мякине, отрубях, жмыхе, комбикормах, а также на стенах и оборудовании при повышенной влажности. Аспергиллезу подвержены все птицы, причем в любом возрасте. Аспергиллы могут поражать даже эмбрион. Обычно это происходит, если для инкубации используют яйца с грязной скорлупой, либо яйца мытые, но мытые с нарушениями правил дезинфекции. У молодняка птиц аспергиллез проявляется в возрасте 3–4 недель. При остром течении смертность достигает 50 %, причем птица погибает в течение 2 суток. Взрослые куры переносят аспергиллез легче, хотя и у них отмечаются снижение продуктивности, слабость, истощение. Переболевшая птица становится хроническим носителем спор. Такие разновидности аспергиллеза, как аспергиллезный энцефалит и менингит, почти в 100 % случаев дают летальный исход [2, 5].
Наряду с возможным провоцированием заболевания патогенные грибки вырабатывают токсины, что является одной из наиболее экономически значимых проблем современного птицеводства. Птицы высокопродуктивных пород птицы чрезвычайно чувствительны к микотоксинам. Потребление слабо контаминированных микотоксинами кормов в течение продолжительного периода, не всегда вызывает проявление очевидных клинических признаков токсичного поражения, но, безусловно, приводит к снижению продуктивности.
Отрицательное воздействие микотоксинов на птиц проявляется в понижении естественной резистентности и иммунного статуса, что ведет к задержке роста и развития организма. Задержка роста происходит из-за подавления синтеза белков и деструкции аминокислот. Организм птицы при дезактивации микотоксинов использует свободные аминокислоты плазмы крови в качестве источника энергии. В результате возникает дисбаланс аминокислот в крови, что приводит к торможению синтеза белка, к снижению выработки антител и, как следствие, к понижению резистентности организма [1].
В литературе имеются данные о применении пробиотических микроорганизмов для профилактики и уменьшения негативного влияния микотоксинов на птицу [1], однако эффективных методов лечения и профилактики заболеваний, вызванных патогенными грибками, на сегодняшний день нет.
Наиболее оправданныйметод борьбы с патогенными микроорганизмами – дезинфекция животноводческих помещений.
С учетом вышесказанного актуальной задачей является разработка препаратов, оказывающих фунгицидное и/или фунгистатическое действие, с целью применения их для дезинфекции животноводческих помещений.
В ТОО «Казфармаком» разработан термовозгонный дезинфицирующий противогрибковый препарат шашка дымовая MycetoDez, где в качестве активно действующего вещества выступает энилконазол – синтетическое антимикотическое средство. Ингибируя биосинтез эргостерина, триглицеридов и фосфолипидов, данное средство вызывает губительное действие в отношении патогенных грибов.
Фунгицидную активность противогрибкового препарата MycetoDez изучали на эталонных штаммах Candida albicans ATCC 10231 и Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 методом двукратных разведений в микропробирках типа Eppendorf согласно CLSI M38-2A [6]. Для тестирования использовали бульон и агар Сабуро.
Суспензию тест-штаммов микроорганизмов готовили непосредственно перед проведением исследования. Для исследования брали только культуры в экспоненциальной фазе роста. Окончательная концентрация суспензии тест-штаммов составляла ~ 5×106 КОЕ/мл. Исследуемые концентрации препарата – от 2 000 до 0,125 мкг/мл. Та концентрация, которая приводила к полному отсутствию роста тест-штаммов, принималась за минимальную фунгицидную активность. Контролем служил рост тест-штамма без препарата.
Микробиологический мониторинг воздуха производственных помещений до и после применения MycetoDez определяли в инкубаторах птицеводческого хозяйства АО Алатау-Кус.
Санацию инкубаторов MycetoDez проводили методом термической возгонки препарата: шашки MycetoDez равномерно размещали в разных частях инкубатора на несгораемой поверхности и поджигали бытовой спичкой. При использовании термовозгонной композиции образовывался аэрозоль серо-молочного цвета с характерным запахом костра. Препарат применяли согласно рекомендуемым дозировкам – 1 флакон на 50 м2. Обработка проводилась однократно. Пробы воздуха для бактериологического контроля отбирались через 30 минут (инкубатор № 2) после дезинфекции и через 12 часов (инкубатор № 1), с помощью портативного прибора для микробиологического контроля воздуха AirPort MD8 (Sartorius). Отбор воздуха осуществлялся через фильтры из желатина с диаметром пор 0,22 мкм в течение 5 мин со скоростью потока воздуха 50 л/мин с последующим нанесением проб на чашки Петри, содержащие питательный агар Сабуро. Среды с фильтрами помещали в охладительный термостат (Binder KT115) на 5 суток при температуре 22 ±1 ºС. Предварительный подсчет выросших колоний производили через 72 ч, окончательный – через 120 ч. Производился подсчет общего числа выросших КОЕ на агаре.
Расчет концентрации микроорганизмов (Х, КОЕ/м3), производили по формуле
(1)
где N – количество колоний, выросших на чашке; 1000 – коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха; V – объем отобранной пробы воздуха, дм3.
В результате определения in vitro эффективности противогрибкового препарата MycetoDez было установлено, что данный препарат обладает фунгицидной активностью по отношению к тест-штамму как Candida albicans ATCC 10231, так и Aspergillus brasiliensis ATCC 16404. Наиболее выраженный фунгицидный эффект отмечен в отношении Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, для которого фунгицидная концентрация составила 8,0 мкг/мл. В отношении Candida albicans концентрация была вдвое выше – 16,0 мкг/мл, что также указывает на достаточно высокую фунгицидную активность.
Результаты изучения противогрибковой активности препарата MycetoDez при производственных испытаниях представлены в табл. 1 и 2 и на рис. 1 и 2.
Таблица 1. Количество КОЕ в образцах воздуха до и через 30 минут после обработки помещения MycetoDez
| Место забора воздуха | До обработки | После обработки |
| Инкубатор № 2 | 52 КОЕ/чашка | 23 КОЕ/чашка |
| 208 КОЕ/м3 | 92 КОЕ/м3 |
Как следует из данных, приведенных в табл. 1, через 30 мин после обработки инкубатора № 2 патогенных грибков в пробах воздуха выявлено на 55 % меньше.
Таблица 2. Количество КОЕ в образцах воздуха до и через 12 часов после обработки помещения MycetoDez
| Место забора воздуха | До обработки | После обработки |
| Инкубатор № 1 | 43 КОЕ/чашка | 2 КОЕ/чашка |
| 172 КОЕ/м3 | 8 КОЕ/м3 |
Как следует из данных, приведенных в табл. 2, через 12 ч после обработки инкубатора № 1 патогенных грибков в пробах воздуха выявлено на 95 % меньше.
Таким образом, результаты производственных испытаний показали, что применение дезинфицирующего противогрибкового препарата MycetoDez в помещениях инкубатора эффективно препятствует росту плесневых грибов.
Дезинфицирующее средство шашка дымовая MycetoDez, обладает противогрибковой активностью в отношении плесневых грибков как в опытах in vitro, так и в производственных испытаниях.
Фунгицидные свойства препарата MycetoDez сохраняются на высоком уровне вплоть до 12 ч с момента проведения дезинфекции, приводя к 95 % гибели патогенных микроорганизмов.
Результаты изучения специфической антимикотической активности противогрибкового препарата MycetoDez свидетельствуют о перспективности его дальнейшего исследования на предмет использования в качестве фунгицида в ветеринарии и/или медицине.
Библиографические ссылки
1. Возможности применения пробиотиков в птицеводстве / Гиндуллин А. И. [и др.] // Ветеринарная микология. 2014. Т.13. С. 362–367
2. Исабаев А. Ж., Орынтаева М. Д. Ветеринарно-санитарная экспертиза продукции птицеводства: учеб-метод. пособие. Костанай, 2016. 120 с.
3. Каштанов А. В. Фунгицидная активность метацида // Успехи медицинской микологии. 2003. Т.1, № 1. С. 98–100.
4. Лихачев А. Н. Оппортунистическая микобиота помещений // Успехи медицинской микологии. 2003 Т. 1, № 1. С. 194–195.
5. Паразитарные и грибковые заболевания кур / Зооинженерный факультет МСХА. URL: http://www.activestudy.info/parazitarnye-i-gribkovye-zabolevaniya-kur/ (дата обращения: 18.09.2017 г.)
6. M38-2A «Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi». Ed. 2. Vol. 28, № 16 / CLSI. Wayne, 2008. 52 р.
